固相萃取是一種基于吸附劑選擇性吸附目標(biāo)物的樣品前處理技術(shù)，廣泛應(yīng)用于環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品檢測(cè)、藥物分析等領(lǐng)域。其核心原理是通過(guò)固定相(吸附劑)對(duì)目標(biāo)物的吸附與洗脫，實(shí)現(xiàn)分離、富集和凈化。然而，SPE的結(jié)果受多種因素影響，包括吸附劑性質(zhì)、樣品特性、操作條件、儀器性能等。以下從多個(gè)維度系統(tǒng)分析其關(guān)鍵影響因素。
一、吸附劑的性質(zhì)
1. 吸附劑類型與極性
吸附劑的化學(xué)性質(zhì)決定了其與目標(biāo)物的相互作用方式。常見(jiàn)的吸附劑包括：
- 反相吸附劑(如C18)：適用于非極性或弱極性目標(biāo)物(如多環(huán)芳烴、油脂)，通過(guò)疏水作用吸附。
- 正相吸附劑(如硅膠、弗羅里硅土)：適用于極性物質(zhì)(如農(nóng)藥、酚類)，通過(guò)極性相互作用(如氫鍵、偶極-偶極作用)吸附。
- 離子交換吸附劑(如季銨鹽、磺酸基材料)：用于帶電離子(如氨基酸、金屬離子)。
- 混合模式吸附劑(如HLB, 親水-親脂平衡)：可同時(shí)吸附極性和非極性物質(zhì)，適用于復(fù)雜基質(zhì)(如血漿、土壤提取物)。
影響：吸附劑極性與目標(biāo)物不匹配會(huì)導(dǎo)致回收率低或雜質(zhì)干擾。
2. 吸附劑粒徑與孔徑
- 粒徑：粒徑越小，比表面積越大，吸附容量越高，但流速可能降低。例如，100-200目硅膠的吸附效率通常高于40-60目。
- 孔徑：孔徑需與目標(biāo)物分子大小匹配。例如，大分子蛋白(如酶)需使用大孔吸附劑(孔徑>50 nm)，而小分子藥物(如抗生素)可用中孔吸附劑(孔徑10-30 nm)。
影響：孔徑過(guò)小會(huì)導(dǎo)致大分子無(wú)法進(jìn)入孔道，吸附不全；粒徑過(guò)大則降低靈敏度。
3. 吸附劑修飾基團(tuán)
功能化修飾可增強(qiáng)選擇性。例如：
- 氨基修飾：用于保留酸性物質(zhì)(如羧酸)。
- 氰基修飾：適合分離含氫鍵作用的物質(zhì)(如核苷酸)。
- 聚合物涂層：減少非特異性吸附(如生物樣品中的蛋白質(zhì))。
影響：修飾基團(tuán)與目標(biāo)物不適配時(shí)，可能導(dǎo)致保留不足或洗脫困難。
二、樣品特性
1. 基質(zhì)復(fù)雜性
- 高鹽基質(zhì)(如海水、血漿)：高鹽濃度可能引起“鹽析效應(yīng)”，降低目標(biāo)物溶解度，促進(jìn)吸附，但過(guò)量鹽分會(huì)堵塞吸附劑孔道。
- 高脂基質(zhì)(如食用油、血液)：脂質(zhì)易非特異性吸附于吸附劑，占據(jù)活性位點(diǎn)并污染洗脫液。
- 復(fù)雜有機(jī)物(如植物提取物)：酚類、色素等次級(jí)代謝物可能與目標(biāo)物競(jìng)爭(zhēng)吸附位點(diǎn)。
解決方案：通過(guò)稀釋、沉淀蛋白(如甲醇沉淀法)或串聯(lián)SPE柱(如先用C18去除脂質(zhì))簡(jiǎn)化基質(zhì)。
2. 樣品pH值
- 離子化狀態(tài)：目標(biāo)物的電離狀態(tài)直接影響其與吸附劑的相互作用。例如，弱酸性物質(zhì)在低pH下以分子態(tài)存在，易被反相C18吸附；而在高pH下解離為離子態(tài)，吸附效率下降。
- 吸附劑穩(wěn)定性：硅膠基吸附劑在pH(<2或>8)下可能發(fā)生水解或溶解。
優(yōu)化策略：調(diào)節(jié)樣品pH至目標(biāo)物pKa附近，同時(shí)避免破壞吸附劑結(jié)構(gòu)。
3. 樣品體積與流速
- 上樣體積：過(guò)量上樣可能導(dǎo)致吸附劑過(guò)載，目標(biāo)物穿透；過(guò)少則降低富集效率。通常建議上樣量不超過(guò)吸附劑最大負(fù)載量的80%。
- 流速：流速過(guò)快會(huì)縮短吸附平衡時(shí)間，導(dǎo)致吸附不全；過(guò)慢則延長(zhǎng)分析時(shí)間。例如，環(huán)境水樣上樣流速推薦為1-5 mL/min。
控制方法：使用恒流泵或重力滴定控制流速，優(yōu)化上樣量。
三、洗脫條件
1. 洗脫溶劑的選擇
- 極性匹配：洗脫溶劑極性需與目標(biāo)物吸附機(jī)制相反。例如，反相C18吸附的目標(biāo)物常用甲醇或乙腈洗脫；正相硅膠吸附的目標(biāo)物可用乙酸乙酯或正己烷洗脫。
- 溶劑強(qiáng)度：強(qiáng)溶劑(如甲醇)洗脫能力強(qiáng)，但可能同時(shí)洗脫雜質(zhì)；弱溶劑(如水)洗脫效率低。可通過(guò)梯度洗脫優(yōu)化(如先用低濃度甲醇去除干擾物，再用高濃度甲醇洗脫目標(biāo)物)。
- 揮發(fā)性：氣相色譜(GC)分析時(shí)需選擇易揮發(fā)溶劑(如、丙酮)，避免殘留干擾。
2. 洗脫體積與流速
- 體積：過(guò)少可能導(dǎo)致洗脫不全；過(guò)多則稀釋目標(biāo)物濃度。通常洗脫體積為吸附劑床體積的1-3倍。
- 流速：洗脫流速應(yīng)低于上樣流速，以保證目標(biāo)物充分解吸。例如，洗脫流速可設(shè)為0.5-2 mL/min。
優(yōu)化建議：通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定最小有效洗脫體積，并控制流速以平衡效率與時(shí)間。
四、操作與儀器因素
1. 活化與平衡
- 活化：新裝填的吸附劑需用溶劑(如甲醇、水)活化，以潤(rùn)濕固定相并排除氣泡。未活化可能導(dǎo)致通道堵塞或吸附效率下降。
- 平衡：上樣前需用樣品溶劑(如水或緩沖液)平衡吸附劑，避免溶劑極性突變導(dǎo)致目標(biāo)物提前解吸。
影響：跳過(guò)活化或平衡步驟會(huì)顯著降低回收率。
2. 柱壓與通道堵塞
- 壓力控制：過(guò)高壓力可能導(dǎo)致吸附劑床壓縮，降低孔隙率；過(guò)低壓力則延長(zhǎng)分析時(shí)間。通常SPE柱操作壓差控制在5-10 kPa。
- 堵塞風(fēng)險(xiǎn)：顆粒物(如土壤懸濁液)、脂質(zhì)或蛋白質(zhì)易堵塞通道。需通過(guò)預(yù)過(guò)濾(0.45 μm濾膜)或串聯(lián)保護(hù)柱(如C18預(yù)處理柱)解決。
3. 儀器密封性與死體積
- 密封性：接頭或閥門漏液會(huì)導(dǎo)致目標(biāo)物損失。需定期檢查O型圈并更換老化密封件。
- 死體積：連接管或閥體中的殘留液體可能污染洗脫液。需盡量減少流路長(zhǎng)度并清洗死體積區(qū)域。
五、方法開(kāi)發(fā)與優(yōu)化
1. 目標(biāo)物特性分析
- 通過(guò)文獻(xiàn)調(diào)研或預(yù)實(shí)驗(yàn)確定目標(biāo)物的極性、pKa、分子量等參數(shù)，選擇適配的吸附劑和洗脫條件。
2. 矩陣實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
- 采用正交試驗(yàn)或響應(yīng)面法優(yōu)化關(guān)鍵參數(shù)(如pH、流速、洗脫體積)，平衡回收率、純度與通量。
3. 內(nèi)標(biāo)法驗(yàn)證
- 添加同位素標(biāo)記物或結(jié)構(gòu)類似物作為內(nèi)標(biāo)，校正操作誤差并評(píng)估方法準(zhǔn)確性。
